डिथियोथ्रेइटोल (डीटीटी) आमतौर पर इस्तेमाल किया जाने वाला कम करने वाला एजेंट है, जिसे न्यू ग्रीन एडिटिव के रूप में भी जाना जाता है।यह दो मर्कैप्टन समूहों (-SH) वाला एक छोटा आणविक कार्बनिक यौगिक है।इसके कम करने वाले गुणों और स्थिरता के कारण, डीटीटी का व्यापक रूप से जैव रसायन और आणविक जीव विज्ञान प्रयोगों में उपयोग किया जाता है।
डीटीटी की मुख्य भूमिका प्रोटीन और अन्य जैव अणुओं में डाइसल्फ़ाइड बांड को कम करना है।डाइसल्फ़ाइड बॉन्ड प्रोटीन फोल्डिंग और स्थिरता का एक महत्वपूर्ण हिस्सा है, लेकिन कुछ प्रायोगिक स्थितियों के तहत, जैसे कि रिड्यूसिबल एसडीएस-पेज विश्लेषण, प्रोटीन पुनर्संयोजन और फोल्डिंग, स्थानिक संरचना को जानने के लिए डाइसल्फ़ाइड बॉन्ड को दो थियोल समूहों में कम करना आवश्यक है। प्रोटीन.डीटीटी डाइसल्फ़ाइड बांड के साथ प्रतिक्रिया करके उन्हें मर्कैप्टन समूहों में कम कर सकता है, इस प्रकार प्रोटीन की स्थानिक संरचना खुल जाती है और विश्लेषण और हेरफेर करना आसान हो जाता है।
डीटीटी का उपयोग एंजाइम गतिविधि और स्थिरता की रक्षा के लिए भी किया जा सकता है।कुछ एंजाइम-उत्प्रेरित प्रतिक्रियाओं में, एंजाइम की गतिविधि ऑक्सीडेंट द्वारा कम हो सकती है।डीटीटी ऑक्सीडेंट के साथ प्रतिक्रिया करके उन्हें हानिरहित पदार्थों में बदल सकता है, जिससे एंजाइम की गतिविधि और स्थिरता की रक्षा होती है।
β-मर्कैप्टोएथेनॉल (β-ME) जैसे पारंपरिक कम करने वाले एजेंटों की तुलना में, डीटीटी को एक सुरक्षित और अधिक स्थिर कम करने वाला एजेंट माना जाता है।यह न केवल जलीय घोल में स्थिर है, बल्कि उच्च तापमान और अम्ल-क्षार स्थितियों में भी अपने अपचायक गुणों को बनाए रखता है।
डीटीटी का उपयोग अपेक्षाकृत सरल है।सामान्य तौर पर, डीटीटी को एक उपयुक्त बफर में घोल दिया जाता है और फिर प्रायोगिक प्रणाली में जोड़ा जाता है।डीटीटी की इष्टतम सांद्रता को विशिष्ट प्रयोग के अनुसार निर्धारित करने की आवश्यकता होती है, और आमतौर पर इसका उपयोग 0.1-1mM की सीमा में किया जाता है।कम सांद्रता कोशिका वृद्धि पर प्रतिकूल प्रभाव को कम कर सकती है और लक्ष्य प्रोटीन की अधिकता के कारण साइटोटॉक्सिसिटी को कम कर सकती है।उच्च सांद्रता अत्यधिक कोशिका चयापचय बोझ का कारण बन सकती है, जिससे कोशिका वृद्धि और अभिव्यक्ति दक्षता प्रभावित हो सकती है।
इष्टतम एकाग्रता निर्धारित करने का तरीका विभिन्न सांद्रता पर आईपीटीजी प्रेरण परीक्षण आयोजित करके लक्ष्य प्रोटीन के अभिव्यक्ति स्तर का मूल्यांकन करना हो सकता है।छोटे पैमाने पर संस्कृति परीक्षण आईपीटीजी सांद्रता (उदाहरण के लिए 0.1 मिमी, 0.5 मिमी, 1 मिमी, आदि) की एक श्रृंखला का उपयोग करके किया जा सकता है और लक्ष्य प्रोटीन (उदाहरण के लिए पश्चिमी) के अभिव्यक्ति स्तर का पता लगाकर विभिन्न सांद्रता पर अभिव्यक्ति प्रभाव का मूल्यांकन किया जा सकता है। धब्बा या प्रतिदीप्ति का पता लगाना)।प्रायोगिक परिणामों के अनुसार, सर्वोत्तम अभिव्यक्ति प्रभाव वाली एकाग्रता को इष्टतम एकाग्रता के रूप में चुना गया था।
इसके अलावा, आप समान प्रयोगात्मक स्थितियों के तहत आमतौर पर उपयोग की जाने वाली आईपीटीजी एकाग्रता सीमा को समझने के लिए प्रासंगिक साहित्य या अन्य प्रयोगशालाओं के अनुभव का भी उल्लेख कर सकते हैं, और फिर प्रयोगात्मक आवश्यकताओं के अनुसार अनुकूलित और समायोजित कर सकते हैं।
यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि इष्टतम एकाग्रता विभिन्न अभिव्यक्ति प्रणालियों, लक्ष्य प्रोटीन और प्रयोगात्मक स्थितियों के आधार पर भिन्न हो सकती है, इसलिए मामले-दर-मामले आधार पर अनुकूलन करना सबसे अच्छा है।
संक्षेप में, डीटीटी आमतौर पर इस्तेमाल किया जाने वाला कम करने वाला एजेंट है जिसका उपयोग प्रोटीन और अन्य जैव अणुओं में डाइसल्फ़ाइड बांड को कम करने और एंजाइम गतिविधि और स्थिरता की रक्षा के लिए किया जा सकता है।जैव रसायन और आणविक जीव विज्ञान प्रयोगों में इसका व्यापक रूप से उपयोग किया गया है।
पोस्ट करने का समय: सितम्बर-28-2023