इष्टतम एकाग्रता का निर्धारण कैसे करें?
इंड्यूसर आईपीटीजी (आइसोप्रोपाइल-बीटा-डी-थियोगैलेक्टोसाइड) के लिए, सांद्रता जितनी अधिक होगी, उतना बेहतर होगा।इष्टतम एकाग्रता विशिष्ट प्रयोगात्मक स्थितियों और वांछित प्रेरण प्रभाव पर निर्भर करती है।
आम तौर पर, IPTG की सांद्रता 0.1-1 mM की सीमा में उपयोग की जाती है।कम सांद्रता कोशिका वृद्धि पर प्रतिकूल प्रभाव को कम कर सकती है और लक्ष्य प्रोटीन की अधिकता के कारण साइटोटॉक्सिसिटी को कम कर सकती है।उच्च सांद्रता अत्यधिक कोशिका चयापचय बोझ का कारण बन सकती है, जिससे कोशिका वृद्धि और अभिव्यक्ति दक्षता प्रभावित हो सकती है।
इष्टतम एकाग्रता निर्धारित करने का तरीका विभिन्न सांद्रता पर आईपीटीजी प्रेरण परीक्षण आयोजित करके लक्ष्य प्रोटीन के अभिव्यक्ति स्तर का मूल्यांकन करना हो सकता है।छोटे पैमाने पर संस्कृति परीक्षण आईपीटीजी सांद्रता (उदाहरण के लिए 0.1 मिमी, 0.5 मिमी, 1 मिमी, आदि) की एक श्रृंखला का उपयोग करके किया जा सकता है और लक्ष्य प्रोटीन (उदाहरण के लिए पश्चिमी) के अभिव्यक्ति स्तर का पता लगाकर विभिन्न सांद्रता पर अभिव्यक्ति प्रभाव का मूल्यांकन किया जा सकता है। धब्बा या प्रतिदीप्ति का पता लगाना)।प्रायोगिक परिणामों के अनुसार, सर्वोत्तम अभिव्यक्ति प्रभाव वाली एकाग्रता को इष्टतम एकाग्रता के रूप में चुना गया था।
इसके अलावा, आप समान प्रयोगात्मक स्थितियों के तहत आमतौर पर उपयोग की जाने वाली आईपीटीजी एकाग्रता सीमा को समझने के लिए प्रासंगिक साहित्य या अन्य प्रयोगशालाओं के अनुभव का भी उल्लेख कर सकते हैं, और फिर प्रयोगात्मक आवश्यकताओं के अनुसार अनुकूलित और समायोजित कर सकते हैं।
यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि इष्टतम एकाग्रता विभिन्न अभिव्यक्ति प्रणालियों, लक्ष्य प्रोटीन और प्रयोगात्मक स्थितियों के आधार पर भिन्न हो सकती है, इसलिए मामले-दर-मामले आधार पर अनुकूलन करना सबसे अच्छा है।
पोस्ट करने का समय: सितम्बर-28-2023