4-नाइट्रोफेनिल बीटा-डी-गैलेक्टोपाइरानोसाइड CAS:200422-18-0

प्रभाव: ओएनपीजी एक सब्सट्रेट है जिसका उपयोग विशेष रूप से एंजाइम β-गैलेक्टोसिडेज़ की उपस्थिति और गतिविधि का पता लगाने के लिए किया जाता है।जब β-गैलेक्टोसिडेज़ एंजाइम मौजूद और सक्रिय होता है, तो यह ओएनपीजी को दो उत्पादों में विभाजित करता है: ओ-नाइट्रोफेनॉल और एक गैलेक्टोज व्युत्पन्न।ओ-नाइट्रोफेनॉल के मुक्त होने से पीले रंग में परिवर्तन होता है, जिसे स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके मापा जा सकता है।

अनुप्रयोग: ओएनपीजी के आणविक जीव विज्ञान और जैव रसायन अनुसंधान में कई अनुप्रयोग हैं:

β-गैलेक्टोसिडेज़ गतिविधि का निर्धारण: ओएनपीजी का उपयोग आमतौर पर β-गैलेक्टोसिडेज़ एंजाइम की गतिविधि को मापने और मात्रा निर्धारित करने के लिए किया जाता है।ओ-नाइट्रोफेनॉल गठन की दर, जो एंजाइम गतिविधि के सीधे आनुपातिक है, को स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक रूप से मापा जा सकता है।

जीन अभिव्यक्ति और विनियमन: ओएनपीजी का उपयोग अक्सर जीन अभिव्यक्ति और विनियमन अध्ययन से संबंधित प्रयोगों में किया जाता है।विशिष्ट प्रमोटरों के नियंत्रण में जीन की अभिव्यक्ति का अध्ययन करने के लिए इसका उपयोग अक्सर संलयन प्रोटीन परख में किया जाता है, जैसे कि आमतौर पर इस्तेमाल की जाने वाली लैक्ज़ संलयन प्रणाली।ओएनपीजी का उपयोग करके मापी गई बीटा-गैलेक्टोसिडेज़ गतिविधि जीन अभिव्यक्ति के स्तर में अंतर्दृष्टि प्रदान करती है।

β-galactosidase गतिविधि के लिए स्क्रीनिंग: ONPG का उपयोग LacZ जीन की उपस्थिति और कार्यक्षमता की पहचान करने के लिए पुनः संयोजक डीएनए तकनीक में एक वर्णमिति स्क्रीनिंग विधि के रूप में किया जा सकता है, जो β-galactosidase को एन्कोड करता है।यह स्क्रीनिंग विधि उन क्लोनों की पहचान करने में मदद करती है जिनमें रुचि का जीन होता है।

एंजाइम कैनेटीक्स अध्ययन: ओएनपीजी β-गैलेक्टोसिडेज़ एंजाइम की कैनेटीक्स का अध्ययन करने में भी उपयोगी है।विभिन्न सब्सट्रेट सांद्रता पर एंजाइम-सब्सट्रेट प्रतिक्रिया की दर को मापकर, माइकलिस-मेंटेन स्थिरांक (किमी) और अधिकतम प्रतिक्रिया दर (वीमैक्स) जैसे गतिज मापदंडों को निर्धारित करना संभव है।