4-नाइट्रोफेनिल बीटा-डी-गैलेक्टोपाइरानोसाइड सीएएस:200422-18-0

प्रभाव: ONPG एक ऐसा सबस्ट्रेट है जिसका उपयोग विशेष रूप से β-गैलेक्टोसिडेज़ एंजाइम की उपस्थिति और गतिविधि का पता लगाने के लिए किया जाता है। जब β-गैलेक्टोसिडेज़ एंजाइम मौजूद और सक्रिय होता है, तो यह ONPG को दो उत्पादों में तोड़ देता है: o-नाइट्रोफेनॉल और एक गैलेक्टोज़ व्युत्पन्न। o-नाइट्रोफेनॉल के मुक्त होने से पीले रंग में परिवर्तन होता है, जिसे स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके मापा जा सकता है।

अनुप्रयोग: ओएनपीजी के आणविक जीवविज्ञान और जैव रसायन अनुसंधान में कई अनुप्रयोग हैं:

β-गैलेक्टोसिडेज़ गतिविधि का निर्धारण: ONPG का उपयोग आमतौर पर β-गैलेक्टोसिडेज़ एंजाइम की गतिविधि को मापने और उसकी मात्रा निर्धारित करने के लिए किया जाता है। एंजाइम की गतिविधि के सीधे समानुपाती ओ-नाइट्रोफेनॉल निर्माण की दर को स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक विधि से मापा जा सकता है।

जीन अभिव्यक्ति और विनियमन: ONPG का उपयोग अक्सर जीन अभिव्यक्ति और विनियमन से संबंधित प्रयोगों में किया जाता है। विशिष्ट प्रमोटरों के नियंत्रण में जीन की अभिव्यक्ति का अध्ययन करने के लिए, आमतौर पर उपयोग किए जाने वाले lacZ संलयन प्रणाली जैसे संलयन प्रोटीन परीक्षणों में इसका प्रयोग किया जाता है। ONPG का उपयोग करके मापी गई बीटा-गैलेक्टोसिडेज़ गतिविधि जीन अभिव्यक्ति के स्तर की जानकारी प्रदान करती है।

β-गैलेक्टोसिडेज़ गतिविधि की स्क्रीनिंग: ONPG का उपयोग रिकॉम्बिनेंट डीएनए तकनीक में एक रंगमापी स्क्रीनिंग विधि के रूप में β-गैलेक्टोसिडेज़ को एनकोड करने वाले LacZ जीन की उपस्थिति और कार्यप्रणाली की पहचान करने के लिए किया जा सकता है। यह स्क्रीनिंग विधि वांछित जीन वाले क्लोन की पहचान करने में सहायक होती है।

एंजाइम गतिकी अध्ययन: ONPG बीटा-गैलेक्टोसिडेज़ एंजाइम की गतिकी का अध्ययन करने में भी उपयोगी है। विभिन्न सब्सट्रेट सांद्रता पर एंजाइम-सब्सट्रेट प्रतिक्रिया की दर को मापकर, माइकलिस-मेंटेन स्थिरांक (Km) और अधिकतम प्रतिक्रिया दर (Vmax) जैसे गतिकी मापदंडों का निर्धारण करना संभव है।